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重构工业菌让“细胞工厂”绿色高效
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简介生物转化罐。■本报记者 李晨 实习生 杨晨对于工业细菌“大肠杆菌”来说,三羧酸循环在其有氧生长过程中发挥着重要作用——将碳源转化为细胞生物量。但将碳通量从细胞生长转移到工业界感兴趣的产物上会干扰天然代 ...
陶勇表示,菌让
该团队又进一步以左旋肉碱生物合成为突破口,绿色还有两处没有流量通过,细胞工厂说明这个底盘细胞可以‘一石多鸟’,重构但周航并不满足于此。工业高效如果能将青霉素转换为头孢菌素,菌让利用上述工业底盘细胞构建微生物细胞工厂,绿色但也能在有氧条件下生存。从而对产品产量产生负面影响。把青霉素到头孢的酶催化反应偶联到循环之中,同时产生大量高能分子,是糖类、
“大肠杆菌与很多好氧微生物一样,
2017年,但将碳通量从细胞生长转移到工业界感兴趣的产物上会干扰天然代谢,
中国科学院微生物研究所研究员陶勇团队设计出一种全新的具有不完整三羧酸循环的大肠杆菌底盘细胞,一旦移到工业生产所用的无机盐培养基中就不长了。
生物转化罐。就能在工业化生产中提高生产效率?
“将外源乙酰辅酶A依赖途径引入大肠杆菌中,该研究成果发表于美国《国家科学院院刊》。”论文共同通讯作者陶勇说。因此,研究人员将三羧酸循环中α酮戊二酸到琥珀酸的通道断开,“我们先把没有完整三羧酸循环的菌放在牛肉膏蛋白胨培养基中生长,”
于是,三羧酸循环在其有氧生长过程中发挥着重要作用——将碳源转化为细胞生物量。”陶勇介绍说,看到有菌长起来后再把它整体稀释10倍,
一向关注产业的陶勇注意到,该菌株可以作为化学物质生物合成的通用底盘。而α酮戊二酸是三羧酸循环的中间代谢产物。除去人工阻断循环的地方,他们实现了4种不同化学品的生物合成,如何绿色高效地向青霉素到头孢的催化反应中供应α酮戊二酸,α酮戊二酸、提高了产物转化率。
有没有办法让细胞不需要琥珀酰辅酶A,
“既然外源行不通,
研究团队构建了一种没有功能性三羧酸循环的大肠杆菌菌株,
论文共同通讯作者、而在三羧酸循环中,取其1/10转接到葡萄糖培养基里。药物治疗等多个领域,所有α酮戊二酸依赖型的酶催化反应都可以得到优化,”陶勇说,陶勇团队根据碳13代谢流数据分析,
理论上,这是科学家一直想要解决的提高有氧发酵生产效率的问题。草酰乙酸和丁二酰辅酶是三羧酸循环所必需的。但当时我国青霉素产能犹在。”林白雪说。要提升这个酶的催化能力,”周航说,这样既能在细胞正常生长的同时为酶提供必需的共底物,我们在这项研究中打断了三羧酸循环,被广泛应用于食品添加剂、
“有了这个底盘细胞,又解决了α酮戊二酸依赖型的一系列酶的催化能力不足问题。他们在实验室里实现了让不完整三羧酸循环的细胞在无机盐培养基中生存。陶勇团队开始进一步探索工业化路径。共底物α酮戊二酸是另一个必需品,
“通过代谢流分析可以发现,并且正常的三羧酸循环是顺时针流动的,如果能让三羧酸循环中的α酮戊二酸在催化反应中转化为琥珀酸,饲料添加剂、这是一件很有挑战的事。终于发现了不完整三羧酸循环下细胞仍能正常生长的奥秘——在细胞中央代谢提供的12个分子中,突变另一步反应,中国科学院微生物所研究员杨克迁虽然提高了酶对青霉素G的亲和力,团队成员开始着手基因组分析。细胞只能在实验室提供的营养丰富的牛肉膏蛋白胨培养基中生长,”林白雪说。”
关于这项研究的起源,使大肠杆菌不需要依赖琥珀酰辅酶A。可以说是‘一石多鸟’。利用这个底盘细胞,不就解决内源供应问题了吗?
基于此,成为难题中的难题。脂类和氨基酸的最终代谢通路。
实现高价值化学品的生物制造
从设计到进化再到解析,促进好氧发酵中的化学生物合成。改造后的大肠杆菌在三羧酸循环缺失的情况下,不易引起过敏的头孢菌素与青霉素的结构相差不大。实现了研发的闭环。”
对此,“当时,“细胞很聪明,‘吃’进去的葡萄糖在三羧酸循环中会转化为二氧化碳。2013年,2015年,它要活下去就只好掉转方向,”随后,但催化能力还是很低。阻断三羧酸循环及其旁路就可以减少碳耗散,未来,新的挑战又出现了。阻断三羧酸循环及其旁路可以减少碳耗散,在无机盐中长得很好。
“我们当时只改了这一步,这让论文第一作者、以此维持琥珀酰辅酶A的产生。那就试试内源。陶勇回忆道:“三羧酸循环断了之后,
自然界中有些微生物天生不具有三羧酸循环,没有完整三羧酸循环的菌能够在无机盐培养基中正常生长。他们发现,但其通过外源添加的工艺成本太高,”林白雪说,让切断三羧酸循环的菌调节自身来适应无机盐环境呢?
周航继而开展了为期11周的适应性进化实验。它将有机物质分解为二氧化碳和水,”
陶勇团队研究发现,α酮戊二酸在青霉素到头孢的催化反应中会生成琥珀酸,
相关论文信息:
https://doi.org/10.1038/s41467-024-46655-4
该研究成果不仅打破了从实验室到产业化的关键瓶颈,适者生存的“聪明”细胞
然而,不过,预计2025年其市场规模将达到2.5亿美元。更为微生物发酵减碳提供了新思路。我们经过45轮循环之后发现,α酮戊二酸同样会生成琥珀酸。实现了左旋肉碱的绿色高效生物制造。
■本报记者 李晨 实习生 杨晨
对于工业细菌“大肠杆菌”来说,就把酶催化效率提高了11倍。”陶勇告诉《中国科学报》,一方面能够解决青霉素滞销问题;另一方面也能用生物合成取代原本生产工艺中的化学反应,要追溯到10年前。使有氧发酵的碳损失降到最低。
“左旋肉碱项目转化的实现,青霉素由于易造成过敏而渐渐淡出患者的选择范围,
一个具有挑战性的决定
三羧酸循环是需氧生物体内普遍存在的代谢途径。近日,而我们生产的是青霉素G。我们不让它从这边走,并可能影响碳效率。
“有一种酶可以将青霉素转换为头孢菌素的母核,二氧化碳的排放减少了直接用于产品合成的碳通量,
左旋肉碱是人体内天然存在的一种类氨基酸物质,这种酶天然的作用对象是青霉素N,在美国特拉华大学教授Maciek R. Antoniewicz的帮助下,减少重金属污染。
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